S. V. Gallac et al.: Morfoanatomía de Ilex argentina e I. paraguariensis

Gallac, Silvia V.

; María I. Mercado

; María E. Guantay

;

Martin L. Zannier

; Graciela I. Ponessa

Centro de Innovación e Investigación para el Desarrollo Educativo, Productivo y Tecnológico (CIIDEPT), Mi-

nisterio de Educación, Provincia de Tucumán. Av. José Ingenieros 260, San Miguel de Tucumán, Argentina.

Instituto de Morfología Vegetal, Fundación Miguel Lillo. Miguel Lillo 251, (4000) Tucumán, Argentina.

Instituto de Ecología Regional, Fac.de Cs. Naturales e Instituto Miguel Lillo, UNT. C.C. 34, (4107) Yerba

Buena, Tucumán, Argentina.

* Autor corresponsal: giponessa@lillo.org.ar, mimercado@lillo.org.ar

Recibido: 17/11/15 – Aceptado: 04/04/16

Morfoanatomía y arquitectura foliar de Ilex argentina

e Ilex paraguariensis var. paraguariensis

(Aquifoliaceae)

Resumen — Gallac, Silvia V.; María I. Mercado; María E. Guantay; Martin L. Zannier;

Graciela I. Ponessa. 2016. “Morfoanatomía y arquitectura foliar de Ilex argentina e Ilex

paraguariensis var. paraguariensis (Aquifoliaceae)”. Lilloa 53 (1). Ilex se encuentra represen-

tada en la República Argentina por siete especies, siendo Ilex paraguariensis var. paragua-

riensis, “yerba mate”, la especie más difundida debido a su cultivo y consumo. Ilex argentina,

adulterante tradicional de la “yerba mate”, se distribuye en el NOA desde Jujuy hasta Cata-

marca. El objetivo del presente trabajo es describir la morfoanatomía y arquitectura foliar de

Ilex argentina e Ilex paraguariensis var. paraguariensis para establecer caracteres foliares

diferenciales. Se utilizaron técnicas convencionales de anatomía y microscopía. Los caracteres

diferenciales para ambas especies son: comportamiento fenológico, morfología foliar, tipo de

aparato estomático, número de estratos del mesofilo, espesor y número de estratos en

empalizada, tamaño y frecuencia de células mucilaginosas, presencia o ausencia de verrugas

suberosas e hidátodos.

Palabras clave: Aquifoliaceae, Ilex, morfoanatomía foliar, arquitectura foliar.

Abstract — Gallac, Silvia V.; María I. Mercado; María E. Guantay; Martin L. Zannier;

Graciela I. Ponessa. 2016. “Leaf architecture and morphoanatomy of Ilex argentina and Ilex

paraguariensis var. paraguariensis (Aquifoliaceae)”. Lilloa 53 (1). Ilex is represented in Argen-

tina for seven species, been Ilex paraguariensis var. paraguariensis, “yerba mate”, the most

widespread species, due to its production and consumption. Ilex argentina, adulterant of “yer-

ba mate”, is distributed in the NOA from Jujuy to Catamarca. The aim of this work is to

describe the morpho-anatomy and foliar architecture of I. argentina and Ilex paraguariensis

var. paraguariansis to establish differential characters which could be used in species char-

acterization. Conventional microscopy and anatomical techniques were used. The main differ-

ential characters found are: phenology, leaf morphology, stomatal type, mesophyll layers,

thickness and number of layers in palisade, size and frequency of mucilage cells, presence or

absence of corky warts, pits and hydathodes.

Keywords: Aquifoliaceae, Ilex, mophoanatomy, foliar architecture.

INTRODUCCIÓN

La familia Aquifoliaceae se encuentra

constituida por 4 géneros; Ilex (400 espe-

cies) presente en Oceanía, Eurasia, América

y África; Phelline (10 especies) representado

en Nueva Caledonia; Sphenostemon (7 espe-

cies) en Nueva Caledonia y Nueva Guinea y

Nemophanthus (género monotípico) en

América del Norte (Zuloaga et al., 2008).

En Argentina solo habita Ilex Linnaeus,

en climas tropicales y subtropicales prefe-

rentemente húmedos, representado por 7 es-

pecies; I. argentina Lillo; I. affinis Gardner;

I. brasiliensis (Spreng.) Loes.; I. brevicuspis

Reissek; I. dumosa Reissek var. guaranina

Loes; I. paraguariensis St.-Hil. var. paragua-

Lilloa 53 (1): 32–45, 2016

riensis Loesener e I. theezans Mart. ex Reis-

sek (Flora Argentina, 2015).

Ilex argentina, comúnmente llamado «ár-

bol de la yerba», «naranjillo», «palo de yer-

ba», «roble», «roble de Tucumán», «roble

tucumano», «roblina», es un árbol dioico

parcialmente caducifolio de 15-20 m de al-

tura (Flora Argentina, 2015). Habita el bos-

que montano de Yungas Argentino-Boliviana,

entre los 900 y 1800 msnm (Giberti, 1994).

Sus hojas se utilizan en forma de infusiones

para el tratamiento de afecciones digestivas,

como diurético, colagogo, colerético, hipo-

colesteromiante, hepatoprotector, antioxi-

dante y para prevenir caries (Toursarkissian,

1980; Barboza et al., 2009). Fue utilizada

durante los siglos XVII al XIX como sustituto

de la «yerba mate», I. paraguariensis var.

paraguariensis, (Giberti, 1994), lo que moti-

vó numerosas publicaciones (Lendner ,1917;

Scala 1921; Giberti, 1989; Degen de Arrua

et al., 2011). Actualmente el consumo de I.

argentina no es muy difundido y se encuen-

tra restringido a los lugares donde habita.

Ilex paraguariensis var. paraguariensis,

popularmente denominado «yerba mate»,

«árbol del mate», «mate», «caá», «caá-gua-

zú», «palo de yerba mate», «yerba señorita»,

es una especie arbórea o arbustiva, dioica,

perennifolia de 2,5 a 15 m de altura (Digilio

y Legname, 1966). Naturalmente habita la

selva paranaense de Misiones y Corrientes y

los países limítrofes de Paraguay, Uruguay y

Brasil entre los 0 - 1100 msnm (Giberti,

1979). Constituye un cultivo importante en

el noreste Argentino, Brasil y Paraguay, ya

que sus hojas son consumidas en forma de

infusión como una bebida tónica y refrescan-

te. Presenta propiedades diuréticas, digesti-

vas, estimulantes, coleréticas, eupépticas,

hipocolesteromiantes, hepatoprotectoras,

anti - cancerígenas, antioxidantes y cardiotó-

nicas (Barboza et al., 2009).

A nivel anatómico, Metcalfe y Chalk

(1950), cita algunas especies del género

Ilex, mencionando la presencia de epidermis

múltiple con células total o parcialmente

mucilaginosas que penetran en el mesofilo y

ocasionalmente hipodermis adaxial.

Loesener (1901), Bass (1975), Giberti

(1979, 1990), Amat (1991), Coelho (1995),

Spegazzini et al. (2000), Duarte y Golam-

biuk (2008) y González de García et al.

(2009), realizaron aportes anatómicos para

I. argentina e I. paraguariensis var. paragua-

riensis y otras especies del género tales como

I. laevigata, I. verticillata e I. affinis, sin em-

bargo definen caracteres contrapuestos den-

tro de las especies llevando a una confusión

en cuanto a la descripción de sus estructuras

foliares.

El objetivo del presente trabajo es carac-

terizar la morfoanatomía y arquitectura fo-

liar de Ilex argentina e Ilex paraguariensis

var. paraguarienses a fin de determinar co-

rrectamente su estructura y determinar ca-

racteres de valor diagnóstico, para su identi-

ficación en material seco y en polvo de

muestras comerciales.

MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIAL VEGETAL

De dos poblaciones de I. argentina de El

Nogalar y Huasancho de la Yerba Buena,

Dpto. Tafí del Valle Tucumán y de una po-

blación de I. paraguariensis var. paragua-

riensis, de un cultivo yerbatal de la provin-

cia de Misiones, Estancia Las Marías, Ruta

Nacional 14 Km 739, Corrientes, se estudia-

ron 5 individuos seleccionados al azar. De

cada individuo se tomaron 10 muestras de

hojas adultas escogiendo de la región media

de la copa orientación norte, la quinta hoja

a partir del ápice.

Fotografías a campo fueron tomadas con

una máquina Sony Cyber - shot 10.1 mega

píxel.

MATERIAL EXAMINADO

Ilex argentina Lillo. ARGENTINA. Prov.

Tucumán, Dpto. Tafí del Valle, El Nogalar,

26°502 473 S 65°422 323 O, 15-IV-2011,

Gallac, Ponessa y Zannier (s/n), (LIL

611473 A y B); Huasancho de la Yerba Bue-

na, 27°1’42"S 65°39’43"O, 20-V-2011, Gallac,

Ponessa y Zannier (s/n) (LIL 611472 A y B).

I. paraguariensis St.-Hil. paraguariensis

Loesener ARGENTINA. Prov. Corrientes, Dpto.

Santo Tome, Gdor. Virasoro, Yerbatal Las

S. V. Gallac et al.: Morfoanatomía de Ilex argentina e I. paraguariensis

Marías, 28° 62 45.873 S, 56° 22 41.643 O,

21-V-2012, Ponessa (s/n).

MICROSCOPÍA

El material fue fijado en FAA (formol,

agua, ácido acético y alcohol 100:350:

50:500 ml) para microscopía óptica y en

glutaraldehído fosfato para microscopía

electrónica.

Para los estudios de venación se realiza-

ron diafanizados empleando la técnica de

Dizeo de Strittmatter (1973). La descripción

de la arquitectura foliar se realizó según la

terminología de Hickey (1979) y Ellis et al.

(2009). Para la clasificación de los estomas

se usó la terminología propuesta por Dil-

cher (1974).

Fragmentos de aproximadamente 2-5 mm

de lámina y pecíolos del material fijado en

FAA fueron montados en soportes de cera

odontológica para su posterior procesamien-

to. Se realizaron cortes histológicos de 20

µm de espesor con micrótomo rotativo de

Minot, los mismos fueron decolorados en

una solución de hipoclorito de sodio al 50%,

lavados, teñidos con violeta de cresil, safra-

nina y tinción doble sucesiva Azul Astra-

Safranina y posteriormente montados en

agua: glicerina 1:1 (Zarlavsky, 2014). Se

realizaron pruebas histoquímicas con Lugol

para detección de almidón, Sudán IV para

lípidos y súber, Azul de Cresil al 1% para

mucílago (Gattuso y Gattuso, 1999; Zarlavs-

ky, 2014).

Del material fijado en glutaraldehído fos-

fato se realizaron cortes gruesos (0,25 µm)

con micrótomo con cuchilla de diamante, los

mismos fueron teñidos con azul de toluidina

(Mercer y Birbeck, 1979) en el Centro Inte-

gral de Microscopía Electrónica (CIME).

Para microscopía electrónica de barrido

(MEB), las muestras fueron fijadas en gluta-

raldehído fosfato 5% con buffer 0.1 M de co-

cadilato de sodio ajustado a pH 7, post fijadas

en tetróxido de osmio 1.5% con buffer 0.1 M

de cocadilato de sodio ajustado a pH 7.2. Pos-

teriormente deshidratadasen acetona, seca-

das mediante punto crítico con CO2 y recu-

biertas con oro (Fine Coat Ion Sputter JEOL

JFC-1100) para su observación.

Se utilizó microscopio óptico Zeiss Axio-

lab y microscopio electrónico de barrido

ZEISS SUPRA-55 VP FESEM (field emission

scanning electron microscope) CIME (Centro

Integral de Microscopía electrónica) con cá-

maras fotográficas digitales adosadas.

Los parámetros cuantificados fueron den-

sidad, longitud y latitud estomática y espeso-

res de los tejidos de la lámina foliar.

RESULTADOS

MORFOLOGÍA

Y ARQUITECTURA FOLIAR

Ilex argentina

Presenta hojas, simples, alternas, coriá-

ceas, a veces deciduas, glabras, con limbo

elíptico u obovado (60-100 x 25-35 mm),

ápice agudo-acuminado deprimido próximo

al nervio medio, margen aserrado (dientes

espinosos) en la mitad superior y entero en

la inferior (Figs. 1A, 1B).

Venación pinnada, camptódroma, bro-

quidódroma. Vena primaria de recorrido

derecho no ramificado y tamaño moderado

(1,8 %) (Fig. 2A). Venas secundarias con

ángulo de divergencia variando irregular-

mente, de agudo angosto a ancho (35º a

75º). Las mismas se bifurcan antes de llegar

al margen y se unen a secundarias superad-

yacentes en ángulo que varía de recto o casi

recto a obtuso. Espacio irregular entre las

venas secundarias (Fig. 2B). Se observan

también venas secundarias decurrentes (Fig.

2C). Venas intersecundarias de tipo com-

puesto y de longitud variable. En algunas

áreas intercostales se observan una o dos

venas intersecundarias, mientras que en

otras áreas no se presentan (Fig. 2C). Venas

terciarias de modelo ramificado transversal.

Venas terciarias intercostales (percurrentes y

ramificadas) y terciarias epidemiales (Fig.

2D). Venas cuaternarias de modelo reticula-

do irregular. Venas de orden mayor (quin-

quenarias) (Fig. 2D). Venación última mar-

ginal ojalada (Fig. 2B). Aréolas de forma

poligonal con vénulas ramificadas (Fig. 2D).

Lilloa 53 (1): 32–45, 2016

Fig.1. A-B) Ilex argentina. A) Aspecto de la planta a campo. B) Hoja con márgenes aserra-

dos en la mitad superior y enteros en la inferior. C-D) I.paraguariensis var. paraguarensis. C)

Aspecto de la planta en cultivo de yerbatal. D) Hoja con márgenes aserrados en toda su

extensión.

S. V. Gallac et al.: Morfoanatomía de Ilex argentina e I. paraguariensis

Fig. 2. Ilex argentina. Arquitectura foliar. A) Aspecto general de la lámina, mostrando la

venación. B-D) Detalle de la venación.

Referencias: a, aréola; vc, vena cuaternaria; vi, vena intersecundaria; vp, vena primaria; vq,

vena quinquenaria; vs, vena secundaria; vs.d, vena secundaria decurrente; vt, vena terciaria;

vt.e, vena terciaria epimedial; vt.ip, vena terciaria intercostal percurrente; vt.ir, vena terciaria

intercostal ramificada; vmo, venación marginal ojalada.

Lilloa 53 (1): 32–45, 2016

Ilex paraguariensis

var. paraguariensis

Presenta hojas perennes, simples alternas,

coriáceas, de lámina obovada, oblanceola-

da, elíptica u oblonga (60-110 x 25-45 mm),

ápice obtuso-retuso, plano cerca de la nerva-

dura media, margen aserrado en toda su

extensión (Figs. 1C, 1D).

Venación pinnada, camptódroma, bro-

quidódroma. Vena primaria de recorrido

derecho no ramificado y tamaño moderado

(1,5 %) (Fig. 3A). Venas secundarias con

ángulo de divergencia variando irregular-

mente, de agudo moderado a ancho (45º a

80º). Las mismas se bifurcan antes de llegar

al margen y se unen a secundarias superad-

yacentes en ángulo que varía de agudo a rec-

to. Espacio irregular entre las venas secun-

darias. Se observan también venas secunda-

rias decurrentes (Fig. 3B). Venas intersecun-

darias de tipo compuesto de longitud varia-

ble. En algunas áreas intercostales se obser-

van solo una vena intersecundaria (Fig. 3C).

Venas terciarias de modelo ramificado trans-

versal. Venas terciarias intercostales percu-

rrentes y ramificadas, y terciarias epidemia-

les (Figs. 3B, 3D). Venas cuaternarias de

modelo reticulado irregular. Venas de orden

mayor quinquenarias (Fig. 3C). Venación

última marginal ojalada (Fig. 3E). Aréolas

de forma poligonal generalmente con vénu-

las simples o ramificadas y otras sin vénulas

(Figs. 3D, 3E).

ANATOMÍA FOLIAR

Ilex argentina

En vista paradermal presenta en la epi-

dermis adaxial, células epidérmicas poligo-

nales de paredes anticlinales rectas a ligera-

mente curvadas, con divisiones anticlinales

(Fig. 4A), cutícula estriada (Fig. 4B) y depre-

siones en forma de fosetas con rebordes cuti-

nizados (Fig. 4C). La epidermis abaxial pre-

senta cutícula lisa con células poligonales de

paredes anticlinales gruesas lobuladas (Fig.

4D), aparatos estomáticos ciclocítico o bicí-

clicos con el segundo anillo incompleto a

igual nivel que las células epidérmicas (Fig.

4E), con reborde cuticular prominente (Fig.

4F). Estomas de 26,8 ± 0,7 µm de longitud

x 22,65 ± 0,3 µm de latitud, densidad esto-

mática de 135 ± 11 estomas/mm².

En transcorte, la lámina es dorsiventral

hipostomática de 239,54 ± 10,5 µm de espe-

sor, presenta epidermis adaxial biestrata,

con divisiones anticlinales en las células del

primer estrato, de 21,74 ± 3,4 µm de espe-

sor, interrumpida por células mucilaginosas

voluminosas, depresiones o fosetas epidérmi-

cas cutinizadas con papilas en la base, que

penetran en el mesofilo en empalizada (Fig.

5C) y epidermis abaxial uniestrata con esto-

mas pequeños a nivel de la superficie epidér-

mica (Figs. 5A, 5E). Epidermis abaxial

uniestrata de 9,98 ± 0,3 µm de espesor. Pa-

rénquima en empalizada de 1-2 estrato,

52,07 ± 6,8 µm de espesor, las células del

segundo estrato más cortas que las primeras

(Fig. 5A). Parénquima esponjoso laxo, 8-10

estratos de 155,75 ± 4,4 µm de espesor, for-

mado por células esféricas y braciformes. Se

observan idioblastos con drusas de oxalato

de calcio (Fig. 5A). Nervio medio prominen-

te hacia la epidermis abaxial colénquima

laminar subepidérmico bi a triestrato hacia

ambas epidermis, un haz vascular colateral

de disposición céntrica, enfrentado a un haz

colateral invertido de menor dimensión,

ambos con casquetes de fibras floemáticas

(Fig. 5B). Haces vasculares menores colate-

rales con vaina parenquimática en forma de

anillo (Figs. 5A, 5D).

Ilex paraguariensis

var. paraguariensis

En vista paradermal presenta epidermis

adaxial con células poligonales de paredes

anticlinales rectas, donde se evidencian divi-

siones anticlinales (Fig. 6A), cutícula lisa a

suavemente estriada. Epidermis abaxial con

células poligonales de paredes anticlinales

rectas a levemente curvadas, cutícula lisa,

estomas ciclocíticos de 24,02 ± 4,1 µm de

longitud x 18,10 ± 2,1 µm de latitud a igual

nivel de las células epidérmicas o ligera-

mente sobreelevados (Figs. 6B y 6C), hidáto-