Lilloa 52 (2): 101–108, 2015
101
Castro, Juan F.
1
; Nora B. Muruaga
2
1
Instituto de Fisiología Animal.
2
Herbario Fanerogámico.
Fundación Miguel Lillo, Miguel Lillo 251, (4000) Tucumán, tel. (0381) 433 0516.
Autor corresponsal: felipecastrobiologo@gmail.com
Recibido: 28/05/15 – Aceptado: 17/09/15
Actividad de infusiones de plantas comerciales de uso
medicinal sobre el sistema de complemento de conejo
Resumen — Castro, Juan F.; Nora B. Muruaga. 2015. “Actividad de infusiones de
plantas comerciales de uso medicinal sobre el sistema de complemento de conejo”. Lilloa 52
(2). El complemento es un componente de la inmunidad de muchos organismos y con dife-
rentes vías de activación. El objetivo de este trabajo fue comprobar el efecto de plantas
comerciales de uso medicinal sobre la actividad in vitro del sistema de complemento de su-
ero de conejo inmunizado con eritrocitos de otra especie de mamífero. De un total de 26
plantas analizadas, 13 mostraron un efecto claramente inhibitorio del sistema de comple-
mento, 2 no tuvieron diferencia con el control y 11 mostraron un efecto amplificador de la
actividad del sistema del complemento. El tratamiento con calor del suero inmune de conejo
inhibe la actividad del complemento sin afectar la actividad aglutinante sobre los glóbulos rojos
incluso en una dilución de 1/64, lo que indica la presencia de anticuerpos anti-glóbulos rojos
humanos
Palabras clave: Complemento; Conejo; Hierbas; Inmune; Medicinal.
Abstract — Castro, Juan F.; Nora B. Muruaga. 2015. “Activity of the medicinal com-
mercial herb infusions on the rabbit complement system”. Lilloa 52 (2). Complement is a
component of the immunity of many organisms and with different activation pathways. The aim
of this paper was to test the effect of medicinal herbs on in vitro activity of complement
system of rabbit serum immunized with erythrocytes from other mammalian species. Of 26
herbs analyzed, 13 showed a inhibitory effect, 2 showed no difference with control, and 11
showed an amplifying effect of hemolytic activity of complement system. Immune rabbit serum
heating was inhibitor of complement activity but was not able to affect the binding of red
blood cells even at dilution of 1/64, indicating the presence of antibodies anti- human red
blood cells.
Keywords: Complements; Herbs; Immune; Medicinal; Rabbit.
INTRODUCCIÓN
EI sistema de complemento forma parte
de los mecanismos de defensa de los verte-
brados contra diferentes organismos patóge-
nos. Éste sistema está formado por una cas-
cada enzimática que tiene como finalidad la
destrucción de microorganismos. La mayor
parte de los componentes de sistema de com-
plemento son proteínas plasmáticas y sólo
una parte son proteínas de membranas (Re-
gueiro y López Larrea, 1998). Para llevar a
cabo su actividad lítica, el complemento
debe activarse lo cual se efectúa mediante
tres procesos inicialmente distintos: la vía
clásica, la vía alterna y la vía de las lectinas.
La vía clásica de activación requiere la
unión del antígeno al anticuerpo. El anticuer-
po generalmente es una inmunoglobulina de
tipo M o G, que al unirse al antígeno provo-
ca la activación del componente C1 de este
sistema. La vía alterna no necesita la unión
antígeno-anticuerpo para activarse. En este
caso el factor C3 se une al antígeno y se pro-
duce la activación de la cascada. La vía de
las lectinas se activa, como la vía clásica a
partir del C1, pero uniéndose a lectinas y no
a anticuerpos. Las tres vías convergen en el
complejo de ataque de membrana, que es un
conjunto proteico que tiene como finalidad
J. F. Castro, N. B. Muruaga: Actividad de infusiones de plantas comerciales
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producir la muerte celular del microorganis-
mo. La activación por la vía clásica es la
más común en los mamíferos e implica la
exposición previa a los antígenos del orga-
nismo patógeno y la generación de anticuer-
pos específicos contra éste (Regueiro y Ló-
pez Larrea, 1998). En los vertebrados poiqui-
lotermos se ha observado la activación de la
vía alterna, por contacto con células extra-
ñas (Yamada y Kiyohara, 1999). Ello se ha
descripto en peces (Suner y Tort, 1994), anfi-
bios (Fernández, 1986), y en reptiles (Fer-
nández y Saad de Schoos, 1990). En nuestro
laboratorio hemos comprobado la actividad
lítica espontánea contra eritrocitos de ma-
míferos por parte de la vía alterna del siste-
ma del complemento de tortuga (Castro y
Fernández, 2009).
Las plantas medicinales son usadas desde
tiempos ancestrales en diferentes pueblos en
el tratamiento de diferentes enfermedades y
dolencias. Su aplicación es variada y su
aporte a la farmacología y a la medicina es
verdaderamente importante (Alonso, 2007;
Makrides, 1998; Molares y Ladio, 2009; Nd-
halala et al., 2009; Sadr Lahijani et al.,
2006; Tsirkin, 1985). La relación entre los
efectos farmacológicos de las plantas medi-
cinales y los procesos fisiológicos subyacen-
tes es un campo de investigación muy activo
porque permite comprender los fundamentos
de su funcionamiento a nivel celular y mole-
cular.
El objetivo de este trabajo fue comprobar
el efecto de plantas comerciales de uso me-
dicinal sobre la actividad in vitro del siste-
ma de complemento de suero de conejo in-
munizado con eritrocitos de otra especie de
mamífero.
MATERIALES Y MÉTODOS
En todos los casos en los ensayos de este
trabajo se realizaron por triplicado.
Se realizaron los correspondientes contro-
les para asegurar que el suero de conejo no
inmunizado no lisa los eritrocitos humanos.
Buffers utilizados.— PBS (buffer fosfato sali-
no): NaCI 6,8 g/l; Na
2
HP0
4
1,4 g/l; KH
2
P0
4
0,43 g/l. Buffer complemento: Na Cl 140
mM, Tris (trishidroximetilaminometano) 10
mM, Ca CI
2
0,1 mM, Mg CI
2
0,1 mM. Buffer
EDTA: Na Cl 140 mM, Tris 10 mM, EDTA
(etilendiamino-tetraacético) 5 mM.
Suero inmune de conejo.— Se usaron cone-
jos adultos Oryctolagus cuniculus L. (Lepori-
dae – Lagomorpha) criados en el laborato-
rio. Estos fueron inoculados con una suspen-
sión al 50% de glóbulos rojos humanos con
adyuvante de Freud’s completo (ACF) (Sig-
ma Inc.) en la parte dorsal de los animales.
Una semana después de la primera inmuni-
zación se le inyectaron 500 µl de glóbulos
rojos humanos sin ACF. Se repitió este paso a
las 4 y 8 semanas. Al finalizar el período de
10 semanas se extrajo sangre de la vena
marginal de la oreja y se separó el suero in-
mune que se utilizó para los ensayos.
Glóbulos rojos humanos.— Se extrajo sangre
humana utilizando heparina al 10% como
anticoagulante. Se centrifugó la sangre y los
glóbulos rojos sedimentados se lavaron 3
veces con PBS. Posteriormente se realizó una
suspensión al 5% en buffer complemento.
Plantas medicinales.— Las muestras fueron
adquiridas en una herboristería en San Mi-
guel de Tucumán. Sólo se usaron para este
trabajo aquellas que resultaron de autentici-
dad comprobada (utilizando microscopio
esterioscópico), las cuales, en número de 26,
se detallan en la Tabla 1.
Preparación de extractos.— Se hicieron infu-
siones usando 2 g de la droga vegetal en 20
ml de agua corriente. Se llevó el agua hasta
ebullición, se retiró de la fuente de calor y se
agregó la droga vegetal previamente pesada.
Se dejó reposar por 30 min y se extrajo la
infusión usando papel de filtro. La muestra
de infusión obtenida se guardó a -10°C hasta
su utilización (Castro y Fernández, 2009;
Castro y Muruaga, 2015).
Efecto de los extractos o infusiones sobre el
complemento.— Con todas las plantas medi-
cinales analizadas se procedió de la misma
Lilloa 52 (2): 101–108, 2015
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manera. Los ensayos se hicieron por triplica-
do. Se procedió de acuerdo con la Tabla 2 en
el cual las columnas representan los pasos
sucesivos de los ensayos. El efecto Inhibidor,
determinado como porcentaje de la hemoli-
sis original producida por el complemento
(medida como aumento de D.O. a 450 nm),
correspondió al cambio producido por dos
volumen de infusión mas cinco volúmenes de
suero de conejo al 10%, sobre un volumen de
una suspensión de eritrocitos de mamíferos
al 5% en el buffer complemento. Hemos de-
signado como 1 (una) unidad de inhibición
a una disminución de un 1% en los valores
de la hemólisis sin agregados.
Determinación de la vía de actividad comple-
mentaria del suero inmune de conejo.— Se
utilizó un suero inmune inactivado por calor
y un suero no inmune sin inactivar en sucesi-
Tabla 1. Listado de plantas utilizadas como antiinflamatorio en medicina popular. Mezcla (a):
trozos de tallo, hoja y fruto (sin flor). Mezcla (b): trozos de corteza, trozos de tallo, hoja,
fruto y flor o inflorescencia. (c): trozos de rama, hoja fruto y flor.
J. F. Castro, N. B. Muruaga: Actividad de infusiones de plantas comerciales
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vos ensayos para comprobar: a) la presencia
de anticuerpos específicos y b) si el sistema
de complemento no inactivado, puede lisar
las células extrañas. Para lo primero se rea-
lizó un tratamiento previo en el cual 2 ml
de suero de conejo inmunizado fue calentado
a 65°C por 30 minutos. Los ensayos llevados
a cabo se muestran en la Tabla 3.
RESULTADOS
Efecto de las plantas medicinales sobre el
complemento de conejo inmunizado.— De
un total de 26 plantas analizadas, 13 mos-
traron un efecto claramente inhibidor, 2 no
tuvieron diferencia con el control y 11 pusie-
ron en evidencia un efecto amplificador de
la actividad hemolítica del sistema del com-
plemento. Una infusión inhibió la actividad
complementaria en más del 75%: Lepidium
didymum; dos lo inhibieron entre un 50% y
un 75%: Rumex pulcher y Marrubium vulga-
re. Por otro lado Lupinus sp. y Senecio sp,
mostraron una actividad inhibitoria entre el
50 y el 25%. En el caso de Parietaria debilis,
Ambrosia eliator, Plantago lanceolata,
Achyrocline satureioides, Geoffroea decorti-
cans, Schinopsis lorentzii, Acorus sp. y Bau-
hinia forficata ssp. pruinosa mostraron un
efecto inhibitorio menor al 25%, pero siem-
pre claramente diferente del testigo, la acti-
vidad espontánea fisiológica del complemen-
to. Atriplex sp. y Matricaria recutita, no pre-
sentaban diferencia significativa con respecto
a la hemólisis sin tratamiento, es decir que
sus valores hemolíticos fueron muy cercanos
al 100% original (Fig. 1). Once muestras
produjeron una actividad mayor aI100%; es
decir que no inhibían, sino que parecerían
aumentar el efecto hemolítico del suero de
conejo, estas son: Passiflora sp., Limonium
brasiliense, Larrea divaricata, Ginkgo bilo-
ba, Aristolochia elegans, Lippia turbinata,
Erythrina sp., Tunilla sp., Minthostachys
mollis, Lavandula sp., Hamamelis virginia-
na (datos no mostrados).
Inhibición de la vía clásica del complemento
por plantas medicinales.— En el tratamiento
con calor del suero inmune de conejo se pue-
de observar que se inhibe la actividad del
complemento sin afectar la actividad agluti-
Tabla 2. Efecto de plantas medicinales sobre el complemento de conejo inmunizado. En todos
los casos antes de agregar los glóbulos rojos se incubó a baño María 30 minutos a 30°C.
Luego de agregar los eritrocitos se llevó nuevamente a baño María a 30°C por 45 minutos,
al terminar el tiempo se le agregó el buffer complemento-EDTA, se centrifugó a 1500 rpm
y se leyó el sobrenadante a 450 nm.
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105
nante sobre los glóbulos rojos, incluso en
una dilución de 1/64; lo que indica la pre-
sencia de anticuerpos anti-glóbulos rojos
humanos. Cuando se restituye el suero no
inmune, la actividad vuelve a ser la misma
que se muestra en el caso donde no hubo tra-
tamiento (Fig. 2). El suero no inmune, no
presenta actividad del complemento ni aglu-
tinante.
DISCUSIÓN
En trabajos previos se ha descripto el
efecto sistema de complemento de suero san-
guíneo de tortuga (Castro y Fernández,
2009), que utiliza la vía alternativa de acti-
vación, sobre eritrocitos de rata. En este
caso, la actividad del complemento de un
mamífero donde la vía puesta a prueba es la
vía clásica. En esta situación observamos
que las infusiones de plantas medicinales
inhibieron el efecto lítico, aunque también
hay algunas que parecen incrementar su ac-
tividad y serán estudiadas más profunda-
mente.
Cabe mencionar que las plantas medici-
nales que inhiben la actividad del sistema
de complemento ponen en evidencia una
posible función antiinflamatoria. Ello de-
mostraría su importancia en la utilización
de estos efectos.
De las plantas utilizadas, el quimpe (Le-
pidium didymun) inhibió la vía clásica de
activación del sistema de complemento, lo
Tabla 3. Determinación de la vía de actividad complementaria de suero inmune de conejo.
J. F. Castro, N. B. Muruaga: Actividad de infusiones de plantas comerciales
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cual representa un panorama importante de
investigación ya que es una planta de fácil
acceso en la provincia de Tucumán.
En los últimos tiempos se ha estudiado la
relación que existe entre diferentes patolo-
gías y las plantas medicinales de uso fre-
cuente en gran parte del mundo (Aybar et
al., 2001; Fawole et al., 2009; Genta et al.,
2009; Grau et al., 2001; Isla et al., 200; Mc-
CIatchey et al., 2009; Mukazayire et al.,
2010; Pawlaczyk et al., 2009; Pedraza-Cha-
verri et al., 2008; Pereira et al., 2009; Su-
bramanyam et aI., 2009; Zampini et al.,
2009). Esto sugiere la importancia de cono-
cer cómo actúan los componentes de las
plantas medicinales, sobre todo en los com-
ponentes de la cascada del sistema de com-
plemento. Debemos mencionar que los re-
sultados encontrados en nuestros experimen-
tos vinculados a la actividad inhibitoria son
coincidentes con las indicaciones usuales
sobre la utilización de estas plantas en la
medicina tradicional que atribuyen a algu-
nas de ellas efectos antiinflamatorios, lo
cual abre un panorama promisorio para
mayores estudios al respecto. Sobre todo en
la necesidad actual de la búsqueda de com-
ponentes antiinflamatorios de origen natural.
AGRADECIMIENTOS
Al la Mg Pilar Medina Pereyra y la Bqca.
María Eugenia Pérez por la lectura del traba-
jo. Este trabajo se llevó a cabo con el apoyo
de la Fundación Miguel Lillo y el Consejo de
Investigación de la Universidad Nacional de
Tucumán.
Fig. 1. Efecto inhibitorio de plantas medicinales sobre la actividad del complemento del suero
sanguíneo de conejo. Porcentaje de inhibición respecto a la lisis natural. En ninguna de las
muestras la dispersión de los datos supera el 8 % de coeficiente de variación.
Lilloa 52 (2): 101–108, 2015
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Fig. 2. Actividad del suero de conejo inhibido por calor y suero sin anticuerpos. SIC: suero
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